實驗步驟
1.稱取0.1g左右的植物組織,放入2ml離心管,加入600ul的DNA提取緩沖液
(Buffer ①+Buffer②+Buffer③+Na2HSO3)。
2.研磨徹底,65℃水浴50min,中間每隔15分鐘顛倒混勻一次。
3.加入600ul的氯仿/異戊醇24:1,顛倒混勻。
4.14000rpm離心10min,取上清液500ul左右到新的1.5ml離心管。
5.加入等體積的異丙醇(約500ul),混勻后放置-20攝氏度,30min。
6.14000rpm,4℃,10min。
7.小心倒掉異丙醇(注意沉淀),加入1ml 75%的乙醇,顛倒混勻,洗滌DNA。
8.14000rpm,離心5min,倒掉75%乙醇。
9.重復步驟8。
10.將DNA沉淀放置于超凈臺,15min,徹底去除多余的乙醇。
11.加入50-200ul的ddH2O,測濃度,跑電泳,鑒定DNA的質量。
12.置于-20℃,保存。
試劑配制
1.Buffer①(200ml):D-山梨醇-12.754g,Tris pH8.-2 2.42g,EDTANa2-0.3722g。
2.Buffer②(200ml):Tris(pH7.5))4.8456g,EDTANa2-3.722g,NaCl-23.492g,CTAB-4g。
3.Buffer③(200ml):N-月桂酸肌氨酸鈉鹽-10g。
4.Na2HSO3。
DNA提取緩沖液配制
Buffer①--13.75ml + Buffer②--31.25 ml+ Buffer③--5ml+NaHSO3--0.19g = 50ml DNA提取緩沖液。