實(shí)驗(yàn)方法
1.取一定的植物葉片組織,用液氮研磨成粉末裝,加入65℃預(yù)熱的TPS DNA 提取液600ul,充分混勻。
2.65℃水浴30min,期間顛倒混勻3-4次。
3.加入氯仿/異戊醇/乙醇(體積比為 400:20:80),混合搖勻。4℃ 12000 rpm 離心10min,轉(zhuǎn)移上清至新的離心管中。(這一步可以忽略不進(jìn)行,如果是想蛋白去除的干凈一些,可以進(jìn)行)
4.加入等體積的異丙醇,顛倒混勻,-20℃放置10 min。4℃ 12000 rpm 離心10 min,棄上清。
5.加70%乙醇500ul洗滌沉淀。4℃ 12000 rpm 低速離心5 min,棄上清,超凈臺(tái)吹干沉淀,加入30ulddH2O溶解DNA。
6.置于-20℃,保存。
TPS提取液配方(100ml)
1M Tris-HCl 10ml
0.5M EDTA 2ml
5M KCl 50ml
ddH2O 38ml