磁珠法通用核酸提取的操作步驟有哪些?

產(chǎn)品特點(diǎn)

◎操作簡(jiǎn)便快速,可在30分鐘內(nèi)獲得理想的核酸,適用于較多樣本的批量提取;

◎提取核酸純度高,無(wú)抑制劑,A260/A280為1.8-2.0;

◎采用自主研發(fā)的改性硅基磁珠,同樣的樣本量提取的核酸更多。

產(chǎn)品介紹

BIOG Routine NA Mag-B Kit是常州百代生物科技股份有限公司研制的專(zhuān)門(mén)用于提取口腔拭子、泌尿生殖道拭子、細(xì)胞懸液、組織懸液、唾液、尿液和水樣等樣本核酸的試劑盒。BIOG Swab NA采用獨(dú)特的裂解液配方,細(xì)胞裂解快速?gòu)氐祝怂崽崛⌒矢摺T噭┖胁捎昧宋覀冏约貉邪l(fā)的改性硅基磁珠,核酸吸附能力強(qiáng),提取核酸純度高。試劑盒操作簡(jiǎn)便快速,特別適用于一次試驗(yàn)較多樣本的批量提取。與同類(lèi)產(chǎn)品相比,提取得到的核酸純度更高,產(chǎn)量更大,最大限度地去除了蛋白、色素、脂類(lèi)、雜質(zhì)污染,可以直接應(yīng)用于各種PCR檢測(cè)和常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟

1. 請(qǐng)自行準(zhǔn)備:無(wú)水乙醇、異丙醇、1.5mL離心管。

2. 取出洗滌液,按以下操作:

a) 洗滌液A:按終濃度30%的比例加入無(wú)水乙醇,如21mL加入9mL無(wú)水乙醇;42mL加入18mL無(wú)水乙醇,混勻。

b) 洗滌液B:按終濃度70%的比例加入無(wú)水乙醇,如9mL加入21mL無(wú)水乙醇;18mL加入42mL無(wú)水乙醇,混勻。

c) 請(qǐng)按需配制洗滌液,盡量不要多配。配制后的洗滌液如一次使用不完,可嚴(yán)格密封后放于室溫陰涼處保存,1周內(nèi)使用完畢。

3. 取1.5mL離心管,加入0.2mL 裂解液、20μL 消化液,再加入0.2mL樣本,振蕩混勻,65℃溫育10 分鐘。

4. 冷卻到室溫,加入0.2mL異丙醇,充分混勻。再加入20μL磁珠復(fù)合液(每次使用前須充分混勻),振蕩混勻3min(注意不要顛倒混勻,以防磁珠粘附于管蓋內(nèi)壁)。

5. 將離心管置于磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附,開(kāi)蓋,徹底吸棄上清液(注意槍頭不要接觸磁珠)。.

6. 加入0.5mL配制后的洗滌液A,將離心管從磁力架上取下,中速振蕩2min,確保磁珠完全分散。再將離心管置于磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附,開(kāi)蓋,徹底吸棄上清液(注意槍頭不要接觸磁珠)。

7. 加入0.5mL配制后的洗滌液B,將離心管從磁力架上取下,中速振蕩2min,確保磁珠完全分散。再將離心管置于磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附,開(kāi)蓋,徹底吸棄上清液(注意槍頭不要接觸磁珠)。

8. 將離心管從磁力架上取下,開(kāi)蓋,干燥約3-5min,至無(wú)明顯乙醇?xì)馕?(注意乙醇要揮發(fā)干凈)。

9. 加入40 μL洗脫液,振蕩至磁珠充分散開(kāi),60℃溫育2min,振蕩混勻30 sec。

10. 將離心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附后,小心吸取上清液至一新的1.5mL離心管中,提取的核酸可直接用于下游實(shí)驗(yàn),或-70℃保存

備用。

注意事項(xiàng):

1、本試劑盒與1.5mL離心管磁力架配套使用,可選用BIOG 多功能通用磁力架。

2、本試劑可用于DNA提取,也可用于RNA提取,試劑盒內(nèi)液體已經(jīng)去RNA酶處理,但如用于RNA提取,實(shí)驗(yàn)所用器具也應(yīng)除去RNA

酶,實(shí)驗(yàn)中最好戴一次性潔凈手套、口罩,提取的RNA溶液可適當(dāng)加入RNA保護(hù)因子(貨號(hào):51090,一般50μLRNA溶液加入3μL。)

3. 裂解液含有刺激性化學(xué)物質(zhì),操作過(guò)程請(qǐng)做好防護(hù)措施,避免直接接觸皮膚,防止吸入口鼻,洗滌液在使用前應(yīng)加入乙醇后充分混勻。


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