產(chǎn)品特點
◎操作簡便快速，可在半小時內(nèi)獲得理想的miRNA；
◎miRNA產(chǎn)量更高，較國內(nèi)部分同類產(chǎn)品CT值小1-2個；
◎樣本范圍廣，可廣泛應(yīng)用于血清、血漿、胸腹水等液體樣本中miRNA的提取。
產(chǎn)品介紹
血清血漿中miRNA的含量較低，不易提取。BIOG血漿血清miRNA提取試劑盒采用了最新的優(yōu)質(zhì)進(jìn)口離子膜，裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化，能高效富集性地分離miRNA。與部分其它公司的同類產(chǎn)品相比，提取的miRNA產(chǎn)量更高，CT值可早1-2個，可直接應(yīng)用于RT-PCR、Northern 雜交和測序等。
操作步驟
1. 請自行準(zhǔn)備：無水乙醇、無RNA酶1.5mL離心管。
2. 取出洗滌液，按以下操作：
a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇，混勻。
b) 洗滌液B：18mL加入42mL無水乙醇；36mL加入84mL無水乙醇，混勻。
c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。
3. 取無RNA酶的1.5mL離心管，加入300μL樣本，300μL 裂解液及30μL 消化液，充分混勻，65℃水浴10 分鐘。
4. 加入0.6mL異丙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與后續(xù)實驗。
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將600μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液；將剩余溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi)，靜置1分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
9. 按每份樣本30μL 取洗脫液（如10份提取樣本，即取300μL 洗脫液），放置于滅菌1.5mL離心管，65℃預(yù)熱。
10. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
11. 取出吸附柱，放入新的1.5mL RNase-free滅菌離心管內(nèi)，在吸附柱中心加入30 μL預(yù)熱洗脫液，靜置2分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘，收集miRNA溶液。提取的miRNA即可用于下一步實驗或-70℃保存。
注意事項
1. 為防RNA酶污染，實驗過程中最好戴一次性干凈手套、口罩，使用處理過的無RNA酶的容器和無RNA酶的超純水 。
2. 血清血漿中miRNA含量較低，難以用NanoDrop測量其濃度，建議直接進(jìn)行RT-PCR或RT-qPCR分析。
3. 洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì)，請做好防護(hù)措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛，請立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時請就醫(yī)。
4.提取的miRNA如暫不使用，應(yīng)-70℃保存，可適當(dāng)加入RNA保護(hù)因子（貨號：51090，一般40μLRNA溶液加入2μL）。
