三十六策 第 13 策 陰陽兩儀
低分 SCI 常見的灌水流程：選個分子進行一正一反操作，細胞動物組織標本數(shù)據(jù)組合起來，發(fā)一篇 SCI，然后換個分子同樣步驟再來一篇。
研究分子機制，有一個最最基本的核心問題：它調(diào)控了誰，以及它被誰調(diào)控?
它調(diào)控了誰是指下游的效應環(huán)節(jié)，一般是明星分子或通路。
它被誰調(diào)控是指上游的驅(qū)動因素，可以是分子、藥物，不會是通路。
二元變量組合理論上有 4 種：藥物+分子，藥物+通路，分子+ 通路以及分子+分子。
藥物+通路
常見于中藥或者天然產(chǎn)物的課題中
在加藥之后檢測一下明星通路分子表達的變化，通過一組具有代表性的通路關(guān)鍵蛋白的表達變化來提示藥物對通路的調(diào)節(jié)作用。
藥物作為主變量本身沒有過表達和 RNAi 沉默一正一反的操作，只有加藥和不加藥進行比較，最多多摸一個藥物劑量梯度然后就是加藥觀察細胞、動物模型上表型的改變，確定有沒效果。
把通路作為下游機制檢測一堆通路蛋白 Western。藥物+通路屬于典型的間接作用機制，知道通路里面關(guān)鍵的 marker 表達被調(diào)節(jié)了， 但到底是藥物作用在哪個分子上調(diào)節(jié)的不確定。
藥物+分子
為了有力說明一個 藥物發(fā)揮作用的過程中某一個已知功能的分子是其效應靶點，Rescue 實驗不可或缺。
有個藥是促進細胞發(fā)生凋亡的，加了藥，發(fā)現(xiàn)有個已知跟凋亡表型相關(guān)的分子上調(diào)了，
那么 Rescue 實驗的設計就是在加藥的同時，再轉(zhuǎn)一個靶分子的 siRNA 進去，把藥物對這個分子上調(diào)的動作阻斷掉，然后看藥物介導的表型。如果表型沒有了，那就說明藥物發(fā)揮作用需要依賴于這個靶點。
（藥→促凋亡，加藥→凋亡表型相關(guān)分子上調(diào)， 加藥+轉(zhuǎn)靶分子 siRNA →表型沒有了）
4 條關(guān)鍵的證據(jù)鏈:
第一，藥物介導表型;
第二，藥物調(diào)控分子;
第三，分子跟表型相關(guān)，一般是選已知明星分子;
第四，阻斷了藥物對分子的調(diào)節(jié)，則藥物對表型的作用會無效化，也就是被回復。
得出科學假設：藥物經(jīng)由分子介導了表型。
分子+通路
單變量的 5 步法：表達差異，正反回復，細胞動物。提高：靠通路，找?guī)讉€通路明星蛋白 Western 檢測一下，再 Rescue 驗證一遍。
通路機制篩、猜：
第一種是大量的做Western檢測通路明星蛋白表達變化，走猜分子+驗證的路子
第二種是通路芯片， 尤其是蛋白芯片 Pathway Array。留同一批的樣品來做芯片和后續(xù)的 Western 驗證
第三種是用通路的抑制劑和激活劑來篩。主要是抑制劑，一般做功能都是激活了某個通路導致表型，加了通路抑制劑阻斷發(fā)現(xiàn)表型變化了就能建立邏輯關(guān)聯(lián)。接下來還是做 Western 驗證。
分子+分子
上游的分子改變肯定比下游的環(huán)節(jié)更重要一些，有因才有果。兩個分子變量進行嵌套最根本的問題是探討分子相互作用的模式。蛋白怎么調(diào)蛋白，蛋白怎么調(diào) RNA，RNA 怎么調(diào)蛋白，RNA 又怎么調(diào) RNA。
總結(jié)
多元變量體系，最簡單的是二元變量組合，一共有 4 種二元變量搭配模式，藥物+通路，藥物+分子，分子+通路，以及分子+分子，后面兩個是重中之重。
藥物加藥物， 通路+通路是沒有的，因為藥物不做因變量，通路不做主變量。
剛接觸分子機制研究的時候， 通路是最好的研究對象。關(guān)于藥物或者分子搭配通路的組合，介紹了三種高效做通路間接機制的方法。單變量的五步法前面四步不用動，表達差異檢測，制備操作工具，細胞表型加上動物表型，做完之后再篩通路?？梢杂玫鞍仔酒Y一下，把有變化的通路明星分子做 Western 驗證，然后 Rescue。
