熱啟動Taq酶的常見問題

關于熱啟動Taq酶,大家還有很多想要了解的方面,小編搜集了一些同學的問題,相信這些答案能幫助很多科研小伙伴更加了解熱啟動Taq酶哦~

圖1. ?Taq DNA聚合酶的三維結構

問題一:我的樣本是腫瘤細胞,可以試試熱啟動Taq酶嗎?

可以。諸如來源于腫瘤、土壤、糞便、血液等困難DNA片段的擴增對Taq酶的特異性要求很高。若使用普通Taq酶進行PCR反應很容易導致假陽性結果,因為Taq酶的最適溫度為72℃,此時活性最佳,低于這個溫度時,仍會有較低的活性,極易錯配或形成引物二聚體,尤其是當設計的引物3’端是G或C,錯配的鏈很難重新解開。而經過了化學修飾、配體法修飾或抗體法修飾的熱啟動Taq酶可以避免在加樣、升溫等階段容易出現的非特異擴增和引物二聚體產生,大幅提升了反應的特異性。像一些國外品牌ABI、Takara,國內的Starvio等等,都具有特異性不錯的熱啟動Taq酶產品。就本實驗室經驗來談,與經過抗體封閉的熱啟動Taq酶相比,StarvioHC熱啟動酶的活性封閉更為徹底,反應特異性也更高,配套的反應緩沖液經多次優化,能有效抵御復雜樣本種雜質的干擾,特別適合從復雜的DNA樣本中(腫瘤組織、血液等)擴增低拷貝基因。

問題二:我要做qPCR,但是目標基因豐度很低,可以使用熱啟動Taq酶嗎?

當然可以!低豐度的靶分子往往被其他DNA分子所淹沒,從而影響PCR反應的效率和產量。熱啟動Taq酶可以提高PCR反應的特異性和靈敏性,從而可以輸出更多的目的片段。市面上不乏高靈敏度的熱啟動Taq酶產品,不用考慮經費問題,可以選擇Thermo Fisher Scientific的Dream Taq熱啟動DNA聚合酶,可擴增低至3pg的人基因組DNA;但想要性價比高,并且靈敏度更高的可使用Starvio熱啟動酶,據實驗數據,每反應體積能夠檢測的最低量可達2pg人基因組DNA。

問題三:我想檢測泌尿生殖道支原體、衣原體感染,需要進行多重PCR,有好用的熱啟動Taq酶推薦嗎?

有的。可以支持多重PCR的熱啟動Taq酶對酶動力要求很高,這個根據您的實驗經費來,充足的話可以看看英國Bioline公司的熱啟動Taq酶(lmmulase)酶動力較好,可做4重PCR,等量起始模板CT30時的熒光信號值最高。目前國內能夠支持多重PCR的熱啟動Taq酶并不多,我們實驗室曾經使用Starvio熱啟動酶檢測過泌尿生殖道支原體、衣原體感染,如圖所示,擴增曲線典型,酶動力強勁,很適合于多重基因檢測。值得一提的是,Starvio熱啟動酶支持四重以內的PCR檢測哦,而且性價比很高,不妨一試!

圖2. 使用Starvio熱啟動酶檢測泌尿生殖道支原體、衣原體感染。1為支原體擴增曲線,2為衣原體擴增曲線,3為內參基因擴增。可見,Starvio熱啟動酶具有靈敏度高,擴增曲線好,酶動力強等優點,很適合于多重基因檢測。

問題四:在使用Starvio熱啟動Taq酶進行PCR反應時,需要注意什么?

問出這個問題的同學已經是個具備科研素養的科研人了哦~ 實驗的成功除了依靠性能優異的試劑外,還需要各方面因素的加持。我們在使用Starvio熱啟動Taq酶時,一定要注意以下幾點,這樣才能獲得滿意的結果!

1.熱啟動—熱啟動Taq酶需要在高溫下啟動其活性。PCR 反應開始前,應將反應混合物 95℃加熱5分鐘。

2.適當混合—反應液體量越少,混合越敏感。應選擇適當的管道或反應器,并進行充分混合。

3.模板用量—模板DNA的量并非越多越好,應根據其來源、濃度、純度、目標片段的豐度等進行調試。

4.熱啟動Taq酶和引物—實驗中引物的設計也非常重要,直接關系結果的好壞,要選擇有良好擴增性能的組合,以保證PCR反應的穩定和高效。

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