一、OTU聚類
a)序列按照97%相似度(Identity)劃分OTU,獲得OTU表格,可以觀測樣品OTU分布情況;
b)主要步驟:
①去重復(fù),去單序列獲得OTU代表序列;
②將所有序列和OTU代表序列,按照97%相似度進(jìn)行OTU劃分;?
減少不同樣品間測序深度帶來的差異 ?
【手段】原始數(shù)據(jù)×OTU豐度矩陣,在一定序列數(shù)水平下,經(jīng)過n次重復(fù),獲得稀疏化樣品×OTU豐度子矩陣,用于β多樣性分析。
二、物種注釋
a) OTU代表序列,采用RDP classifier算法與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對,比對置信閾值70%~80%,獲得分類學(xué)信息,匯總成OTU分類學(xué)表格。
三、OTU聚類與注釋在論文中的描述
a)OTU聚類的表述:
? ? ? 例如:Operation Taxonomic Units(OTUs) were clustered with 97% similarity (3% cutoff) using XXX software(Version, website), and chimeric sequences were identified and removed.
b)物種注釋的表述:
? ? ? 例如:The phylogenetic affiliation of each 16S rRNA gene sequence was analyzed by? RDP classifier(website) against the Database(version) 16S rRNA database using confidence of(threshold) 70%.