半胱氨酸耗竭誘導(dǎo)小鼠胰腺腫瘤鐵死亡(二)

書(shū)接上文,我們繼續(xù)學(xué)習(xí)這篇高大上的cancer。

回顧一下上文說(shuō)了什么玩意兒,腦子一直是暈的,我又對(duì)著原文看了一遍,上文說(shuō)了半胱氨酸對(duì)于鐵死亡具有抑制作用,胱氨酸/谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn) 過(guò)程中異常重要,抑制該系統(tǒng)功能可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)的ROS集聚,無(wú)論是胱氨酸饑餓及Xc-系統(tǒng)抑制均可以導(dǎo)致細(xì)胞的應(yīng)激和脂質(zhì)氧化增強(qiáng),通過(guò)NAC/TRO可以減輕脂質(zhì)氧化,然后,作者又構(gòu)建了雙重重組基因鼠(KPFSR)。然后,在KPFSR中條件敲除Slc7a11后發(fā)現(xiàn)腫瘤的生長(zhǎng)減緩,甚至出現(xiàn)了腫瘤消退表現(xiàn)。

鐵死亡的研究一直受限于其缺乏典型及公認(rèn)的病理表現(xiàn),在他莫昔芬治療的KPFSR腫瘤中,觀察到大量氣球狀上皮細(xì)胞的病變,具有脂滴樣結(jié)構(gòu)和間斷的巨線粒體,通常并列于壞死區(qū),但是在veicle處理中很少發(fā)現(xiàn)。

Hematoxylin and eosin(H&E)–stained sections of tumor tissue from KPFSRmice treated with vehicle (left) or tamoxifen (right).L, lumen of malignant epithelium; N, necrosis; yellowarrowheads, lipid droplets; black arrowheads,megamitochondria
T E Mimages from tamoxifen-treated KPFSR tumors.L D , l i p i d d r o p l e t s ; N , n u c l e u s ; a r r o w h e a d i n d i c a t e sdamaged mitochondrion,線粒體腫脹,脊消失或斷裂

無(wú)論是經(jīng)過(guò)vesicle還是他莫昔芬處理后的腫瘤組織,在凋亡及增值水平均未發(fā)現(xiàn)明顯變化,但是一種脂質(zhì)氧化的副產(chǎn)物4HN增多,也是鐵死亡的一種征象。

這里Ki-67及PH3是一種增值的標(biāo)記.CC3是凋亡的標(biāo)記
這里棕褐色染得是4HN,結(jié)果大家都懂的
油紅染色看看lipid droplet

作者在KPFSR鼠中正常胰腺中卻沒(méi)有觀查到鐵死亡的病理現(xiàn)象,說(shuō)明鐵死亡在腫瘤中是一種選擇性表型(這表述只要聽(tīng)不懂就是高級(jí),我懂…………)。最后,作者對(duì)轉(zhuǎn)基因工程鼠所致的惡性上皮腫瘤進(jìn)行分離,并應(yīng)用激光捕獲顯微切割和RNA測(cè)序。然后,對(duì)比一個(gè)eratin處理的HT-1080細(xì)胞中鐵死亡基因表型(凋亡的基因未予以納入),發(fā)現(xiàn)SLC7A11清除的腫瘤上調(diào)基因富集在鐵死亡基因集中。作者最終得出腫瘤是以一種組織中可觀察到達(dá)的鐵死亡形式抑制其生長(zhǎng)的。

這是GSEA富集分析,我不是特別懂,主要看虛線位置

文章到這里,似乎完成了組織、體內(nèi)表現(xiàn)驗(yàn)證,結(jié)論半胱氨酸可以抑制鐵死亡。這就完了……就這…………,半胱氨酸怎么抑制鐵死亡的。且聽(tīng)作者繼續(xù)分(忽)解(悠)。結(jié)合以往的研究表明,半胱氨酸進(jìn)入細(xì)胞后可以形成谷胱甘肽(體內(nèi)的一種還原劑)。谷胱甘肽是脂質(zhì)過(guò)氧化物解毒酶Gpx4(3)的關(guān)鍵輔助因子,作者發(fā)現(xiàn)半胱氨酸耗竭迅速降低了兩個(gè)人PDAC細(xì)胞系的谷胱甘肽水平。在細(xì)胞中添加GSH類(lèi)似物GSHEE可以減輕ROS和鐵死亡,但是在細(xì)胞中抑制GSH合成抑制劑BSO不能誘導(dǎo)ROS增加及細(xì)胞活力改變,表明缺乏GSH并不足以誘導(dǎo)鐵死亡。

E圖是打的質(zhì)譜測(cè)的GSH

半胱氨酸是不是還有什么別的代謝產(chǎn)物參與到鐵死亡中了呢。作者用了13C標(biāo)記的胱氨酸和質(zhì)譜測(cè)量標(biāo)記的代謝物來(lái)追蹤外源性半胱氨酸的代謝,發(fā)現(xiàn)除了GSH外,半胱氨酸的代謝產(chǎn)物還有輔酶A(24小時(shí)內(nèi))。沒(méi)有觀察到牛磺酸、乳酸、檸檬酸或谷氨酸的標(biāo)記。說(shuō)明了半胱氨酸的代謝產(chǎn)物只有兩個(gè):GSH和輔酶A.

輔酶A是由半胱氨酸通過(guò)泛酸途徑合成的,XC-系統(tǒng)的抑制降低了輔酶A的水平,增加了泛酸的水平。意思就是半胱氨酸+泛酸合成了GSH和輔酶A

PANT是泛酸

用外源性輔酶A在PDAC細(xì)胞中可以防止IKE誘導(dǎo)的鐵死亡。泛酸激酶抑制劑PANKi可以促進(jìn)IKE誘導(dǎo)鐵死亡。

Panki與BSO協(xié)同結(jié)合,誘導(dǎo)鐵死亡。

與艾地苯酮(CoQ10的膜通透性類(lèi)似物)或單不飽和脂肪酸共處理可阻斷BSO/Panki誘導(dǎo)的鐵下垂,而飽和或多不飽和脂肪酸不能。

idebenone艾地苯酮,剩下的那三個(gè)沒(méi)見(jiàn)過(guò)的肯定是各種脂肪酸了

到此為止,是不是可以用一張圖總結(jié)一下了。

cancer的圖就是間接明了,有些雜志圖畫(huà)的很漂亮,都是完(虛)美(有)無(wú)(其)缺(表)

本文機(jī)制部分及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分到此為止了,如果其他雜志的話,這些足夠發(fā)一篇很漂亮的高分PAPER了,但是作者就是不滿(mǎn)足,你能信??作者又想針對(duì)胱氨酸代謝找到藥物作用的靶點(diǎn),這里能用的靶點(diǎn)可能也就是Xc-系統(tǒng)和胱氨酸了,胰腺癌腫瘤組織比較致密,乏血供,難以通過(guò)全身性應(yīng)用Xc-抑制劑,那么通過(guò)耗竭胱氨酸就是比較理想的辦法,這里用到了一個(gè)高大上的技術(shù)——工程酶胱氨酸酶(engineered enzyme cyst(e)inase我也不知道翻譯的對(duì)不對(duì))。這個(gè)酶可以消耗全身的胱氨酸及半胱氨酸。在體外實(shí)驗(yàn),這個(gè)酶誘導(dǎo)脂質(zhì)氧化并降低對(duì)IKE敏感的PDAC細(xì)胞的存活率,鐵死亡抑制劑可以減輕這個(gè)作用。

這個(gè)酶這么好用的話,是不是體內(nèi)也要驗(yàn)證一波,這里作者用了KPC(一種自發(fā)成瘤的鼠),對(duì)成瘤鼠,分別給予vesicle、大劑量的胱氨酸酶或小劑量胱氨酸酶10天(每個(gè)處理組n=2,這你能信,文章快到最后了,估計(jì)錢(qián)造的差不多了,買(mǎi)不起這么多鼠了)。經(jīng)酶治療的腫瘤的組織病理學(xué)檢查顯示嚴(yán)重的鐵死亡表型,有廣泛的脂滴形成、間質(zhì)破裂、血管減壓和壞死。

黃色指的是脂質(zhì),黑色是線粒體
左側(cè)是高分化,右側(cè)是低分化腫瘤,不明白這里作者想要表達(dá)什么意思

透射電鏡顯示增大的脂滴形成、細(xì)胞外的脂滴和線粒體缺陷,尤其是在經(jīng)酶處理的KPC腫瘤中

T E Mof pancreatic tumors from the KPC model treated with vehicle [(F) and (H)] or cyst(e)inase [(G) and (I)].Red arrowheads indicate mitochondria; LD, lipid droplets; N, nucleus;
C圖是脂滴,D是血管擠壓,E是壞死,F(xiàn)是定量分析

在組織中鐵壞死表型是4HN+;CC3-.

最后,作者用四只KPC鼠作了大劑量酶處理與以往vesicle處理組腫瘤大小的比較,發(fā)現(xiàn)大劑量酶治療的小鼠腫瘤生長(zhǎng)明顯低于對(duì)照組(P<0.0 5)。最后,得出結(jié)論,半胱氨酸(半胱氨酸)的治療性耗竭可以誘導(dǎo)Kras/p53突變的小鼠胰腺腫瘤的鐵死亡。

至此,全文結(jié)束。大佬的文章,吾輩只能仰視,不敢妄加評(píng)斷。歡迎大家批評(píng)、指正!

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