操作步驟

1. 請自行準備：無水乙醇、異丙醇、1.5mL 滅菌潔凈離心管、10mL 滅菌潔凈離心管、10mL 無菌注射器。

2. 取出洗滌液，按終濃度 70%的比例加入無水乙醇，如 3mL 加入 7mL 無水乙醇；15mL 加入 35mL 無水乙醇，充分混勻。

3. 取 10mL 滅菌潔凈離心管，加入 2mL 尿液樣本、2mL 裂解液、4μLDNAConc.及 60μL 消化液，振蕩混勻，65℃水浴 15 分鐘。

4. 加入 5mL 異丙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響 DNA 的提取與后續實驗。

5. 將富集吸附柱放在抽濾裝置上，再將 10mL 無菌注射器針筒插入富集吸附柱上端，將上述溶液轉入針筒內，靜置 2 分鐘，真空抽濾至富集吸附柱內液體剛剛抽濾完畢（約 2-10 分鐘，注意不要抽濾太干，太干不利于后續步驟開展）。

6. 向針筒內加 1mL 洗滌液，靜置 2 分鐘，真空抽濾至富集吸附柱內液體剛剛抽濾完畢（約 1-5 分鐘，注意不要抽濾太干，太干不利于后續步驟開展）。

7. 向針筒內加 0.5mL 洗滌液，抽濾 2 分鐘。

8. 按每份樣本 30μL 取洗脫液（如 10 份提取樣本，即取 300μL 洗脫液），放置于滅菌 1.5mL 離心管，65℃預熱。

9. 將富集吸附柱放入收集管內，12,000 rpm 常溫離心 2 分鐘，離去殘留的洗滌液。

10. 取出富集吸附柱，放入新的 1.5mL 滅菌潔凈離心管內，加入 30 μL 預熱的洗脫液，靜置 2 分鐘，12,000 rpm 常溫離心 2 分鐘，收集 DNA溶液。提取的 DNA 即可用于下一步實驗或-20℃保存。

特別說明：?

1.本試劑盒配套 BIOG 真空核酸提取裝置使用，可提取 2mL 之內量的尿液 DNA，研究者可根據實驗需要選擇適當量的樣本進行提取，所用試劑需按比例調整。

2.洗滌液最好現用現配，按需計算用量后配制。加入乙醇后的洗滌液如使用不完，2-8℃密封保存不超過 1 周。

3.在裂解液剛剛抽濾完畢后，應立即加入洗滌液，以防濾膜干燥。

4.裂解液、洗滌液含有刺激性化學物質，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛，請立即用清水或生理鹽水沖洗。5.裂解液、洗滌液如有白色絮狀物析出屬正常現象，置于 37℃水浴中溶解即可。