? What？之前不了解這個東西，沒有接觸過基因重組小鼠實驗。偶然發現一篇文章PNAS2014年的（默默感謝那篇文章全體作者），里面有涉及到這個基因重組技術。今天做了文獻發表，就在發表的前一天，跟朋友那才了解，獲悉Cre-Lox 在動物試驗里是很常用的技術。
? 整理的內容就是目前自己理解的，哪里不對請糾正，含淚萬分感謝。也希望給不了解它的人提供一些有幫助的信息。
? Cre是最早微生物里發現的基因，它可以編碼Cre recombinase一種基因重組酶。Cre重組酶可以識別特異性序列，這個序列被稱作Loxp序列，有34bp長(建議維基百科看詳細介紹，此處重點)。Cre重組酶會識別到Loxp序列并且修改Loxp之前的基因／序列（取決于Loxp的方向，建議維基百科看詳細介紹，此處重點）。經常用這個技術來knockout gene。一般這個基因重組技術會用到雜交，打個比方，父親老鼠里的某特異性基因A（我們感興趣的基因，比如細胞態／組織特異表達的基因）里，在胚胎時期被修改并插入Cre基因序列，這樣以來它所有細胞的基因組里這個特異基因中都帶有了Cre基因序列，Cre基因的表達和翻譯受到該特異性基因A的啟動子影響，也就是說如果一個細胞里A基因被激活／可以轉錄的，那么Cre基因也同樣被激活／可以轉錄的。但是，還沒完，Cre轉錄之后目的是編碼蛋白啊，一種叫做Cre重組酶的東西，還需要Loxp啊。通常Loxp會在母親鼠里面，目的是切掉兩個Loxp中間的序列或者基因，起到一定的生物學作用。經常被用到的也是我看的這篇文章提到的，胚胎細胞開始在母親鼠的Rosa26區域／基因的兩個外顯子之間轉入Loxp序列（據說都這么干），Loxp中間是一個STOP基因，這段序列可以阻止下游的基因被轉錄，類似轉錄停止位點，還沒完，還是在Rosa26基因的兩個外顯子之間緊隨Loxp-stop-Loxp之后，還有一些reporter gene被加入里，報告基因一般包括LacZ，GFP，YFP，etc （如果不了解這些報告基因，建議維基百科看詳細介紹，此處重點）。所以說在通常情況下母親鼠里全體細胞里Rosa26基因都是轉錄到STOP序列后停止了。還有一點要提的就是，Rosa26這個基因在老鼠里幾乎是所有細胞／組織都會轉錄的（啟動子是工作的）但是這個基因沒什么大用，所以大家在這里面各種修改添加都不會影響到小鼠的健康問題。那么，現在有了A基因-Cre父親鼠和Rosa26-Loxp-reporter母親鼠，接下來就是讓他們別閑著造小鼠。他們的孩子就一般標記成A-Cre::RLacZ/ A-Cre::RGFP/ A-Cre::RYFP/ etc，“::”代表的意思是？沒錯“雜交”，所以這個雜交小鼠一般是研究的目的樣品。 因為在這一代出生的小鼠身上同時包含了兩處基因被修飾的地方，一個是A基因，一個是Rosa26區域／基因。目的基因A一般應該是特異性的，只在某些細胞或者某些組織特異表達的（一些marker基因），那么在這些A基因表達的細胞／組織里Cre也跟著表達了，因為Cre嚴格受到A基因的啟動子調控，隨后Cre的mRNA編碼成Cre重組酶出去工作了（細胞主要的功能體現者是蛋白質）。隨著Cre重組酶的表達接下來會切斷Rosa26兩個外顯子內，兩個Loxp序列之間的STOP基因，所以呢，沒錯后面的Repoter gene開始轉錄了，大便通暢的趕腳。所以我們可以通過檢測Repoter基因產物可以間接的檢測到這些細胞，比如組織染色，in situ hybridization (ISH）染色，熒光檢測，etc。這時候可能會問到，那直接在特異基因后添加個repoter gene不就可以輕松搞定了嗎？何必這么麻煩，弄來弄去還需要嘿咻嘿咻。重點在這里，不論是加在A基因后的Cre也好，或是直接加個repoter gene也好，他們都會直接／即時的受到A基因的活性調節，非常同步；基因重組小鼠的情況則不然，Cre重組酶表達后會不可逆轉的切掉該細胞的STOP基因，repoter gene會持續表達下去，也就是即使后來Cre基因不轉錄了，你依然會看到repoter gene在該細胞表達，頓時感覺想出這個技術的人太牛了，所以這個基因重組技術通?？梢员挥糜谧粉櫩睖y一些細胞態轉化分化，“即使你變了我也認得你”。
? 以上就是總結的關于Cre-Lox基因重組老鼠的技術，當然好多信息沒有被提到，粗略淺顯就是希望通俗易懂。也是為了轉天自己忘了，再看看能提個醒！JS里第一個生物學知識筆記，還會繼續堅持。
感謝提到的朋友：LYP 和 WQL。
參考：https://www.biomart.cn/experiment/430/431/439/2285703.htm
