2017.07.13實驗兔外周血EPCs分離培養(yǎng)

一、物品準備:

1、抗凝取血管

2、2%臺盼藍溶液,1克臺盼藍配5ml純水。

3、HBSS緩沖液、1083

4、EBM培養(yǎng)基,加入生長因子+10%FBS。

5、細胞記數(shù)板、電腦

6、離心機設置緩慢減速

7、房間紫外滅菌


二、取血(動物房)

1、兔子耳中動脈取血10ml,抗凝管每管2ml。

三、分離單核細胞(5810R房間)

1、HBSS稀釋血液(可用可不用)

2、15ml管每管添加3ml1083,再再表面緩慢加入3ml血液,400Xg(rcf)30min離心。

3、用槍頭緩慢吸出單核細胞,勿貪多。

四、接種細胞(細胞房)

1、培養(yǎng)皿提前1-2h用FN包被,有木有特異性?

2、用PBS清洗細胞,2-3次,1000轉(zhuǎn)5min。

3、種板,3ml吹打細胞,6孔板,每孔2ml。

4、臺盼藍染色觀察細胞活力,未染色細胞>95%。

5、觀察細胞:鋪路石樣細胞,程團塊狀。

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