一、物品準備:
1、抗凝取血管
2、2%臺盼藍溶液,1克臺盼藍配5ml純水。
3、HBSS緩沖液、1083
4、EBM培養(yǎng)基,加入生長因子+10%FBS。
5、細胞記數(shù)板、電腦
6、離心機設置緩慢減速
7、房間紫外滅菌
二、取血(動物房)
1、兔子耳中動脈取血10ml,抗凝管每管2ml。
三、分離單核細胞(5810R房間)
1、HBSS稀釋血液(可用可不用)
2、15ml管每管添加3ml1083,再再表面緩慢加入3ml血液,400Xg(rcf)30min離心。
3、用槍頭緩慢吸出單核細胞,勿貪多。
四、接種細胞(細胞房)
1、培養(yǎng)皿提前1-2h用FN包被,有木有特異性?
2、用PBS清洗細胞,2-3次,1000轉(zhuǎn)5min。
3、種板,3ml吹打細胞,6孔板,每孔2ml。
4、臺盼藍染色觀察細胞活力,未染色細胞>95%。
5、觀察細胞:鋪路石樣細胞,程團塊狀。
圖片發(fā)自簡書App
圖片發(fā)自簡書App