Pacific Bioscience公司簡稱PacBio

讀長可達2-3萬個堿基，平均長度8千個。

Pacbio測序也是邊合成邊測序。

DNA polymor固定在玻璃底板上：首先在聚合酶上標上生物素，在玻璃底板上標上鏈酶親和素。利用生物素和鏈合親霉素的親和力結合在一起。

加入帶四色熒光的dNTP引物，酶會長時間的抓住這個dNTP，激發光從底部照射進來，能在較長時間內發出熒光。一個循環完成后，焦磷酸基團掉落，進行第二輪，第三輪循環。

小孔設計：小孔直徑70nm。

PacBio文庫：DNA文庫呈啞鈴型。打開后即是一個圓形，可以周而復始的測序。

判讀準確率：87.5%，（錯誤的原因可能是多讀一個堿基，，錯誤是隨機的，多讀幾遍之后，這些偶然誤差是可以校正的。

PacBio讀長的限制因素：

1，DNA鏈上出現缺口，激發光較強會導致DNA鏈出現缺口。

2，強光照射導致DNA酶變性，導致測序過程終止。

3，文庫本身長度，要做20-30k的文庫難度很大。

測序復合物：聚合酶，測序引物，測序模板。

一個板上有15萬個小孔，由于測序復合物的隨機不均勻分布，約有1/3的孔是空的，1/3的孔是一個復合物，1/3的孔有兩個及以上的復合物。有效孔數約為5萬個，產生的數據約為50000*8000=0.4G.

PacBio的優勢：

1，PacBio可以直接測堿基被修飾的狀態。如遇見甲基化的堿基，合成速度會放慢，光譜特征會改變。

2，建庫過程無需PCR,由于PCR過程中AT堿基比GC堿基復制速度快，會導致最終AT的含量比較高，影響測序質量。GC bias少。

3，測序速度快：測序速度取決于酶反應速度，一秒3個堿基。