二十四型 第1型 增殖
24 型的定位：梳理表型相關(guān)的知識，包括標志物、研究方法、研究策略、研究思路等內(nèi)容，所以就相當于是在研 究表型過程中的實驗手冊。
(一)增殖表型的概述
第一種是體細胞的增殖方式：有絲分裂。
另一種是性生殖細胞所采用的增殖方式：減數(shù)分裂。
增殖現(xiàn)象都是普遍存在的
(二)增殖表型如何檢測?
從宏觀到微觀，研究層次可以分為:人群→動物→組織→細胞→分子
(1)分子層面檢測增殖表型
1)與增殖相關(guān)的分子標志物（應用最廣泛）
MCM (微小染色體維持蛋白）只存在于真核細胞中。只在細胞的增殖期才能檢測到，它的表達在 G1/S 轉(zhuǎn)換點達到峰值，在分化期和靜息期時，表達缺失。
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細胞核相關(guān)抗原 Ki-67。Ki-67 在細胞的 G0 期不表達， G1 中期到后期出現(xiàn)表達，S 期和 G2 期表達逐漸增加，有絲分裂期達到高峰，細胞分裂后迅速降解。
推測 Ki-67 可以調(diào)節(jié)細胞周期
Ki-67 能和 DNA 或者 RNA 發(fā)生相互結(jié)合
Ki-67 在細胞分裂期參與合成核糖體。
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增殖細胞核抗原 PCNA（周期素）。在 G0/G1 期幾乎沒有表達，G1 晚期表達大幅度增加，S 期達到高峰,G2/M 期表達下降。
DNA 聚合酶δ的輔助蛋白
參與 DNA 損傷的修復
參與細胞周期的調(diào)控
和 p21 相互作用
2)和干細胞相關(guān)的分子標志物
CD44 是胰腺癌中腫瘤干細胞常用的分子標志物，因此可以通過檢測 CD44 的表達水平，證實胰腺癌中腫瘤干細胞的情況，間接地證實腫瘤細胞增殖能力的強弱。
3)檢測抑癌基因
通過 western 或者 qPCR，證實 p53 以及 PTEN 分子表達水平降低，從而間接地說 明腫瘤細胞惡性程度上升，腫瘤的增殖表型也會顯著的提升。
(2)細胞層面檢測增殖表型
1)直接檢測細胞的增殖狀態(tài)
MTT 法：通常取 5 個時間點(通常就是 5 天)。把 5 天中每一天的吸光度數(shù)據(jù)都記錄下來，最后形成一條細胞增殖的曲線。通過比較不同處理方式或者不同實驗組之間，細胞增殖曲線的高低，就可以判斷細胞增殖情況的快慢。替代技術(shù)：CCK8 染色實驗
Brdu 染色法：Brdu 是胸腺密啶的衍生物，可以標記活細胞中新合成的 DNA，代替胸腺嘧啶選擇性地整合到復制細胞新合成的 DNA 中。演化出：Edu染色法
RTCA 實時細胞分析儀：實時記錄細胞增殖狀態(tài)，還可以用于細胞黏附、凋亡、轉(zhuǎn)移
2)檢測細胞的克隆形成能力
即便缺少細胞之間的交互和信號通路，腫瘤細胞也可以由單獨一個細胞，增殖形成大量的子代細胞，最終形成一個細胞克隆。這種現(xiàn)象就被稱之為克隆形成能力。評估腫瘤細胞的離體增殖能力的大小以及腫瘤在體外的致瘤能力的大小。
干細胞：“干細胞懸浮成球試驗”檢測干細胞的增殖能力。
(3)組織層面檢測增殖表型
1)檢測分子標志物
石蠟切片：免疫組織化學 IHC ，檢測和增殖相關(guān)的分子標志物，比如 PCNA 和 Ki-67。
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新鮮組織樣本
注意區(qū)分癌組織和癌旁組織
2)細胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)上的差異
對于組織內(nèi)部細胞排列順序和排列結(jié)構(gòu)的檢測→腫瘤細胞發(fā)生惡性增殖
(4)動物層面檢測增殖表型
移植瘤動物模型
總結(jié)
