外泌體-游離RNA提取方法及特點(diǎn)

BIOG產(chǎn)品特點(diǎn)

◎操作簡便快速,可在半小時(shí)內(nèi)獲得理想的RNA;

◎提取RNA純度高,無抑制劑,A260/A280為1.8-2.0;

◎產(chǎn)量更高,較國內(nèi)同類產(chǎn)品高出20%;

◎可用于小量(200μL)血清、血漿、胸腹水、腦脊液、滑膜液、水樣等液體樣本中游離樣本中RNA的提取;

◎不含苯酚和氯仿等有毒溶劑,安全無毒。

產(chǎn)品介紹

BIOG cfRNA Easy Kit是常州百代生物科技股份有限公司研制的專門用于血清、血漿、胸腹水、腦脊液、滑膜液、水樣等樣本中游離RNA(包括游離腫瘤細(xì)胞RNA、microRNA、病毒RNA等)的提取試劑盒。BIOG cfRNA Easy Kit采用了最新的優(yōu)質(zhì)進(jìn)口離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化,能高效地分離RNA。提取得到的RNA較其它品牌的同類試劑盒產(chǎn)量更大,純度更高,最大限度地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染,可以直接應(yīng)用于Northern雜交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文庫構(gòu)建、體外翻譯等各種常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

操作步驟

1. 請自行準(zhǔn)備:無水乙醇、無RNA酶1.5mL離心管。

2. 取出洗滌液,按以下操作:

a)洗滌液A:21mL加入9mL無水乙醇,混勻;42mL加入18mL無水乙醇,混勻。

b) 洗滌液B:9mL加入21mL無水乙醇,混勻;18mL加入42mL無水乙醇,混勻。

c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀,可在37℃溶解,搖勻后使用。

取無RNA酶的1.5mL離心管,加入200μL樣本,4μLRNA Carrier混合均勻,再加入300μL裂解液及20μL消化液,漩渦震蕩10秒,充分混勻,56℃水浴10分鐘至完全裂解。

4. 加入1mL無水乙醇,輕輕顛倒混勻,如有半透明懸浮物,不影響RNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

5. 將吸附柱放入收集管內(nèi),將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi),靜置2分鐘,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。

6. 將吸附柱放回收集管內(nèi),將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi),重復(fù)步驟5。

7. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL洗滌液A至吸附柱內(nèi),12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。

8. 將吸附柱放回收集管內(nèi),加500μL洗滌液B至吸附柱內(nèi),靜置2分鐘,12,000 rpm 4℃離心1 分鐘,棄收集管內(nèi)廢液。

9.將吸附柱放回收集管內(nèi),12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,離去殘留的洗滌液。

10. 取出吸附柱,放入新的無RNA酶的1.5 mL離心管內(nèi),加入30-50μL洗脫液,靜置3 分鐘,12,000 rpm 4℃離心2 分鐘,收集RNA溶液。

11.70℃保存,或直接用于下一步實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1. 為防RNA酶污染,實(shí)驗(yàn)過程中最好戴一次性干凈手套、口罩,使用處理過的無RNA酶的容器和無RNA酶的超純水 。

2. 裂解液、洗滌液含有刺激性化學(xué)物質(zhì),請做好防護(hù)措施,避免直接接觸皮膚,防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛,請立即用清水或生理鹽水沖洗,必要時(shí)請就醫(yī)。

3. 裂解液如有白色絮狀物析出屬正常現(xiàn)象,置于37℃水浴中溶解即可。

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