操作步驟：

1. 請自行準備：無水乙醇、異丙醇、滅菌雙蒸水、二甲苯及 1.5mL 離心管。

2. 取出洗滌液，按以下操作：

a) 洗滌液 A：按終濃度 30%的比例加入無水乙醇，如 7mL 加入 3mL 無水乙醇，14mL 加入 6mL 無水乙醇，充分混勻。

b) 洗滌液 B：按終濃度 70%的比例加入無水乙醇，如 3mL 加入 7mL 無水乙醇；6mL 加入 14mL 無水乙醇，充分混勻。

3. 樣本處理：a) 取 5-8 μm 厚石蠟切片 5-10 張（含載玻片），65℃放置 10 分鐘，放入裝有二甲苯的玻璃瓶中，浸泡 10 分鐘后，用手術刀或刀片，將組織刮下，放入 1.5 mL 離心管。b) 將 5-10 張石蠟切片（不含載玻片）直接放入裝有 1.2 mL 二甲苯的 1.5 mL 離心管中，蓋緊管蓋，60℃金屬浴 10 分鐘，取出管子后震蕩 10 秒，12,000 rpm 室溫離心 2 min，徹底棄上清。 c）石蠟塊：手術刀刮取 20-30 mg 石蠟包埋組織樣本（盡量去除石蠟部分），放入裝有 1.2 mL 二甲苯的 1.5 mL 離心管中，蓋緊管蓋，60℃金屬浴 15 分鐘，取出管子后震蕩10 秒，12,000 rpm 室溫離心 2 min，徹底棄上清。d）福爾馬林固定、未包蠟樣本：取 30 mg 樣本，用手術刀盡量切碎，置于 1.5 ml 離心管中，加入 500 μL 滅菌雙蒸水，渦旋振蕩 20 秒， 12,000 rpm 離心 2 min，棄上清。重復 1 次，轉步驟 6 處理。

4. 在上述處理過的脫蠟樣本管中加入 1.2 mL 無水乙醇，旋渦震蕩 30 秒，12,000 g 離心 2 分鐘，棄上清（注意不要倒掉沉淀，少量乙醇可用吸水紙吸去，未包蠟樣本不需此步）。

5. 開蓋，室溫放置 5 分鐘，去除殘留無水乙醇。

6. 加入 170 μL 裂解液 I，30μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴至組織完全消化裂解。（一般為 30-60 分鐘，皮膚、肺臟、子宮等結締組織較多的切片應適當延長消化時間，最好消化至溶液中無可見的組織碎片。）

注意： 如需除去 RNA，可在加入裂解液后先加入 20μL BIOG DNase –Free RNase A(貨號：51006)，振蕩混勻，室溫放置 5 分鐘。再加入30μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴至組織完全消化裂解。

7. 加入 200 μL 裂解液 II，振蕩混勻，56℃水浴 5 分鐘。

8. 加入 400μL 異丙醇，充分振蕩混勻。將吸附柱放入收集管內(nèi)，將混合物用移液器吸入吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 離心 2 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。

9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加 500 μL 洗滌液 A 至吸附柱內(nèi)，靜置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。

10. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加 500 μL 洗滌液 B 至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。

11. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加 500 μL 洗滌液 B 至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 離心 1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。

12. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 離心 2 分鐘，離去殘留的洗滌液。同時，按每份樣本 30-50μL 取洗脫液（如 10 份提取樣本，即取300-500μL 洗脫液），放置于滅菌 1.5mL 離心管，65℃預熱。

13. 取出吸附柱，放入新的滅菌離心管內(nèi)，加入 30-50 μL 預熱的洗脫液，靜置 2 分鐘，12,000 rpm 離心 2 分鐘，收集 DNA 溶液。提取的DNA 即可用于下一步實驗或-20℃保存。

注意事項：

1、洗滌液在使用前應加入乙醇后充分混勻，最好現(xiàn)用現(xiàn)配，每次根據(jù)所需提取的樣本量計算后適量配制。

2、本試劑盒提取 DNA 品質(zhì)有賴于樣本本身的質(zhì)量，組織是否及時固定、固定時間、固定劑種類等均影響 DNA 的完整性。組織放置時間過長未及時固定、固定時間過長超過 24 小時、組織脫蠟不徹底、消化不完全等，都會影響 DNA 的得率和質(zhì)量。

3、石蠟切片厚度不宜超過 8 μm，組織塊應盡可能切碎或用液氮研磨，以便消化完全。

4、裂解液、消化液、洗滌液含有刺激性化學物質(zhì)，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。