1.介紹病毒的培養(yǎng) 與滅活

把病毒注入細胞工廠后，必須均勻搖晃，站病毒能平均分布到每一層。操作完成后，將細胞工廠放入36.5℃培養(yǎng)箱，每日觀察并記錄被感染細胞的脫落情況。

脫落越多說明病毒生長越多。平均3-5天就可以收獲病毒。

把病毒培養(yǎng)出來，只是這一步，后面還有疫苗原液的純化過程，還有很多的標定的過程，

評價的過程，這些過程可能漫長的過程，所以真正疫苗的成功，還有一段的周期。

病毒培養(yǎng)的原理：病毒能夠寄生于宿主細胞達到增殖。

宿主細胞的選擇與培養(yǎng)：細胞需鋪一單層，貼壁生長。

設計問題：如何得知病毒的毒力與增殖能力？

觀察細胞的脫落與病變情況。

滅活：5天之后，細胞工廠已經(jīng)繁殖出數(shù)量可觀的病毒，可以進行第一次病毒滅活了。

因為快到收獲“死病毒”的階段，所以行話叫“割韭菜”。

滅活就是消滅病毒的活性，操作者將滅活液注入細胞工廠并搖晃，使滅活液均勻分布。之后放入2-8℃的冰箱靜置24小時。這一個滅活劑1，滅活動力曲線上來看，它在兩個小時會達到一定的滅活的量。四個小時后幾乎就全部滅活了。但是我們還是嚴謹?shù)刈屗掷m(xù)24小時滅活。收獲原液之后還要進行二次的滅活。。二次滅活后病毒已無生存的可能，但疫苗研制需要做到百分之百的謹慎。實驗者必需確認桶內病毒全部死亡。成為行業(yè)內最后一道安全關卡，用之前的細胞培養(yǎng)瓶，將二次滅活的病毒原液取樣，再次放入培養(yǎng)瓶，如果3天內不能使新的病變，則再取培養(yǎng)瓶中細胞液進行培養(yǎng)，循環(huán)重復操作3次，若均無細胞病變，則說明滅活成功。

通過盲傳三次檢測的疫苗滅活原液送護送至疫苗工廠進一步純化加工。制作不同濃度的研究性疫苗。為后續(xù)疫苗的臨床評價和應用打下基礎。

2.操作人員的工作程序與精神壓力

P3工作室 人員的工作壓力：光聲的警報，中控，中控室 的各種工作安排

3.取核酸操作者會把病毒樣本從凍存管中取出，往病毒里注入裂解液，把病毒毒株移入試管是實驗人員最基礎的操作。，也是最容易產(chǎn)生氣溶膠污染的高危環(huán)節(jié)。

為保證不產(chǎn)生氣溶膠，實驗人員每次操作都要求移液器槍頭絕對不能擠出最后一滴液體。

分寸全憑手感毫厘間的拿捏，每日1000多次重復的移液動作。不能有一次失誤。

放入漩渦振蕩器充分混勻，很快病毒堅硬的蛋白質外殼開始瓦解，使病毒的核酸能夠從中跑出來。試管中液體包含著大量病毒核酸及裂解的雜質。

所以為了節(jié)約防護服，我們盡量的少喝水，不去衛(wèi)生間。

因為我們實驗室人員在P3室 里操作的同時，要聽著聲音的報警還要聽著光的報警，

還要聽著中控室老師的各種工作的安排。所以他在里面是高度緊張又得關注所有的這種細節(jié)。

洗脫雜質為了只把核酸篩選出來，需要放入離心機使核酸與其他物質分離

取核酸基因測序

對疾控工作人員的不了解不理解甚至拒絕共同乘坐電梯。

熒光PCR技術

檢測新冠病毒毒力及繁殖能力

操作者會將病毒注入細胞培養(yǎng)瓶，在特制的細胞培養(yǎng)瓶中，健康的細胞會貼壁生長

我們評價病毒，是不是能夠侵蝕細胞，它是不是能夠很好地增殖。我們是用培養(yǎng)瓶的形式去觀察的。瓶底養(yǎng)了一層細胞，這些細胞是貼壁生長的。當病毒感染了細胞，產(chǎn)生細胞病變以后，這些細胞就會脫落。這樣就能看到空班以及脫落的情況。脫落的細胞在液體中游離。

當我們看到培養(yǎng)瓶里的細胞達到95%以上全部都脫落了。說明病毒毒力和繁殖能力相對來說比較強。病毒種子誕生了。疫苗研制過程中需要的大量的死病毒都來自于這粒種子。

在病毒培養(yǎng)階段，實驗人員最擔心的是病毒活著卻不增殖。好的細胞也很重要，在浩如煙海的細胞里尋找，談何容易？即便選擇好的品種，同時還要選擇好的細胞代次，好的細胞培養(yǎng)時間，這些都需要千百次實驗驗證才能做到。

所以沒有多年的技術及操作技巧的積累，很難第一時間摸索出準確的病毒培養(yǎng)方法。